干貨解析：對于ELISA終止液您了解多少?
 

　　細胞氧化應激的定量評價方法大致分做三類：

　　1)測定由活性氧修飾的化合物;

　　2)測定活性氧消除系統酶和抗氧化物質的量;

　　3)測定含有轉錄因子的氧化應激指示物。

　　進一步尚有：

　　1)生物體內氧化應激的程度足以產生應答;

　　2)活體內難以蓄積;

　　3)在活體內不是被代謝，而是穩定存在，等等。理解這些要點對于臨床普及推廣都很有用。

　　細胞增殖-毒性檢測實驗操作步驟

　　終止液是用于測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK法應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。下面以BUNSEN的CCK8試劑盒為例，簡要說明細胞增殖-毒性檢測的操作步驟

　　方法/步驟

　　在96孔板中配制100μl的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時 (在 37℃，5% CO2 的條件下)。

　　向培養板加入 10μl 不同濃度的待測物質。

　　將培養板在培養箱孵育一段適當的時間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時)。

　　向每孔加入 10μl CCK8 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數)。

　　5. 將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。

　　用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

　　如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化 。

　　細胞周期檢測的原理：

　　PI法是經典的周期檢測方法。PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結合，其結合的量與DNA的含量成正比例關系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態，從而計算出各個期的百分含量。PI染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。

　　常用的細胞染色方法有:

　　1.簡單染色法,常用堿性染料如美藍等進行簡單染色;

　　2.革蘭氏染色法,主要包括結晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復染四個過程;

　　3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶劑主要是由伊紅美藍組成;

　　4.吉姆薩染色法,吉姆薩染色原理與結果和瑞特染色法基本相同;

　　5.細胞免疫熒光染色法,免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結合。

　　蛋白提取/定量

　　蛋白提取頻道,提供蛋白提取實驗用蛋白提取試劑盒，蛋白裂解液，蛋白濃度測定試劑盒等蛋白質實驗用試劑及耗材。其中蛋白提取系列包括：植物蛋白提取試劑盒，細胞組織蛋白提取試劑盒，胞膜/細胞核蛋白提取試劑盒，全蛋白提取試劑盒等。

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